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          多肽純化的多種問題解答
        1. 發布日期:2018-01-12     信息來源:      瀏覽次數:3023
          • 1. 多肽含量與多肽純度有什么區別?
            一條多肽產品中除了多肽本身還包括生產過程中帶入的水份及有機鹽分等雜質,多肽純度僅指多肽本身所含肽產品的含量及雜質的含量,不包括水份等雜質;而多肽含量則是指目標多肽在產品中的凈含量,一般以N元素分析或氨基酸分子的方法來檢測;因此一條多肽即使純度達到99%,因為產品中還包含水份及有機鹽分等,它的含量可能也只有70-80%。
            2. 如何選擇純化過程中使用的色譜柱填料?
            不同序列的多肽理化性質及疏水性有很大的區別,多數情況分子量小于4000和親水性多肽用C18柱分離效果*,分子量大于5000和疏水性的多肽以C4柱分離效果*,而C8柱介于C18和C4柱之間,其應用效果與C18柱更相似;對一些特殊選擇性的多肽,也可選擇苯基柱和聚合物色譜柱。
            3. 在純化過程中選擇聚合物填料的原則是什么?
            需要使用高于正常pH或溫度條件進行純化時,可以使用pH范圍極寬的聚合物色譜柱,它的優點就是在pH條件下不會降解,可以使用強酸和強堿作為流動相進行分離純化。
            4. 影響多肽純度檢測結果的因素
            影響多肽純度檢測結果的因素很多,主要包括:流動相體系、色譜柱型號、柱溫、波長及色譜儀的性能指標,每一項不同都可能造成結果產生誤差。
            5. 反相色譜分離純化后,怎樣去除產品中流動相產品中的TFA,乙腈等雜質?
            凍干的辦法應該可以除去大多數TFA和乙腈,只要不超過允許范圍,這種辦法是zui簡單、有效的。對TFA含量要求更高的一些藥物肽凍干的方法一般無法*達到要求,需要進行專門的轉鹽或脫鹽。 
            6. 多肽一般有哪幾種鹽的形式?通過什么方式轉鹽或脫鹽?
            多數多肽都是在TFA體系下分離純化的,所以多肽以TFA鹽的形式zui多,其次藥物肽一般有醋酸鹽及鹽酸鹽的形式,極少數藥物肽會有一些特殊的鹽形式。轉鹽方式多為離子交換法和HPLC法,而脫鹽可用透析袋和超濾膜。
            7. TFA在緩沖液中是不是只起到調節PH的作用?TFA的濃度越高基線漂移越厲害,那是不是說TFA的濃度在緩沖液PH允許的情況下越低越好?
            (1)TFA起到類似離子對的作用,一般濃度在0.05-0.1%,過高的濃度,會使溶液偏酸,長時間使用可能影響柱子壽命。
            (2)同時TFA可以抑制硅膠表面硅醇基,改善堿性化合物的峰型。有時0.1%TFA分離不好的話??梢钥紤]加大濃度到0.2%。但要注意用完后及時沖洗色譜柱。
            (3)走梯度時,因為走成基線漂移,但對制備的影響不大。

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