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          網站首頁  ◇  技術支持  ◇  大鼠Wnt-2b蛋白(WNT2b)酶聯mianyi檢測試劑盒使用說明書
          大鼠Wnt-2b蛋白(WNT2b)酶聯mianyi檢測試劑盒使用說明書
        1. 發布日期:2019-06-21     信息來源:      瀏覽次數:868
          • 使用前仔細閱讀本說明書。本酶聯mianyi試劑盒是基于雙抗體夾心技術原理,來檢測大鼠Wnt2B,只能用于研究用途,不得用于醫學診斷。
            用    途用于大鼠血清、血漿及相關液體樣本中Wnt2B測定。
            工作原理
               本試劑盒采用的是生物素雙抗體夾心酶聯mianyi吸附法(ELISA)測定樣品中大鼠Wnt2B水平。向預先包被了大鼠Wnt2B單克隆抗體的酶標孔中加入大鼠Wnt2B,溫育;溫育后,加入生物素標記的抗Wnt2B抗體。再與鏈霉親和素-HRP結合,形成mianyi復合物,再經過溫育和洗滌,去除未結合的酶,然后加入底物A、B,產生藍色,并在酸的作用下轉化成*終的黃色。顏色的深淺與樣品中大鼠Wnt2B的濃度呈正相關。
            試劑盒組成

            試劑盒組成48孔配置96孔配置保存
            說明書1份1份 
            封板膜2片(48)2片(96) 
            密封袋1個1個 
            酶標包被板1×481×962-8℃保存
            標準品160ng/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存
            標準品稀釋液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存
            鏈霉親和素-HRP3 ml×1瓶6 ml×1瓶2-8℃保存
            生物素標記的抗WNT2B抗體0.5ml×1瓶1 ml×1瓶2-8℃保存
            顯色劑A液3 ml×1瓶6 ml×1瓶2-8℃保存
            顯色劑B液3 ml×1瓶6 ml×1瓶2-8℃保存
            終止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存
            濃縮洗滌液(20ml×20倍)×1瓶(20ml×30倍)×1瓶2-8℃保存

             
            需要而未提供的試劑和器材

            1. 37℃恒溫箱。
            2. 標準規格酶標儀。
            3. 精密移液器及一次性吸頭
            4. 蒸餾水,
            5. 一次性試管
            6. 吸水紙

             
            注意事項

            1. 從2-8℃取出的試劑盒,在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
            2. 各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差
            3. 嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
            4. 為避免交叉污染,要避免重復使用手中的吸頭和封板膜。
            5. 不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
            6. 底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。

             
            洗板方法
            手工洗板方法:甩掉酶標板內的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙,酶標板朝下用力拍幾次;將稀釋后的洗滌液至少0.35ml注入孔內,浸泡1-2分鐘。根據需要,重復此過程數次。
             
            自動洗板:如果有自動洗板機,應在熟練使用后再用到正式實驗過程中
            標本要求
            1.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
            2.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融。
            操作程序

            1. 標準品的稀釋:(本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。)
            80ng/L5號標準品120μl的原倍標準品加入120μl標準品稀釋液
            40ng/L4號標準品120μl的5號標準品加入120μl標準品稀釋液
            20 ng/L3號標準品120μl的4號標準品加入120μl標準品稀釋液
            10ng/L2號標準品120μl的3號標準品加入120μl標準品稀釋液
            5 ng/L1號標準品120μl的2號標準品加入120μl標準品稀釋液

             
              2.根據代測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定,能使用復孔的盡量做復孔。
              3.加樣:1)空白孔,空白對照孔不加樣品,生物素標記的抗WNT2B抗體,鏈霉親和素-HRP,只加顯色劑A&B和終止液,其余各步操作相同;2)標準品孔:加入標準品50ul,鏈霉親和素-HRP50ul(標準品中已事先整合好生物素抗體,故不加);3)代測樣品孔:加入樣本40ul,然后各加入抗WNT2B抗體10ul、鏈霉親和素-HRP50ul,蓋上封板膜,輕輕震蕩混勻,37℃溫育60分鐘。
              4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。
              5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
             6.顯色:每孔先加入顯色劑A50ul,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
             7.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
             8.測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后10分鐘以內進行。
             9.根據標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線回歸方程,再根據樣品的OD值在回歸方程上計算出對應的樣品濃度。也可以使用各種應用軟件來計算。 
             
            操作程序總結:


            試劑盒性能:

            1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.92以上。
            2.批內與批間應分別小于9%和15%
             檢測范圍:
            檢測范圍:2ng/L -90ng/L
             保存條件及有效期:
             保存:2-8℃。
            有效期:6個月(2-8℃)。

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