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          wb成像系統在wb實驗中該如何使用?你知道嗎?
        1. 發布日期:2020-03-11     信息來源:公司新聞      瀏覽次數:8112
          •    wb成像系統在wb實驗中該如何使用?你知道嗎?

              wb成像系統是否能夠拍攝到ECL的圖像主要取決于設備是不是帶有制冷的CCD,只有制冷的CCD才夠靈敏地捕捉到膜上發出的光。隨著Cooled-CCD技術的發展,成像系統成本越來越低,因而在現在的實驗室里這些設備越來越普遍。本實驗室目前采用的是wb成像系統,具有靈敏度高,成像速度快、成像效果清晰等優點。
              wb成像系統儀器的使用非常簡單:
              1)在使用前開機預冷,待儀器溫度降到-20℃才可以進行檢測;
              2)將化學發光檢測試劑盒中的A和B按照1:1混合;
              3)PVDF膜正面朝上放于暗箱,用移液槍將發光液均勻地涂在膜上,關閉暗箱箱門,進行曝光;
              4)曝光可以自動曝光,也可手動曝光,一般先點擊自動曝光,觀察成像效果,若不理想可再手動調節曝光時間;
              5)外wb成像系統還具有多張拍攝模式,可將一張膜在不同的曝光時間下連拍6張,使曝光更方便。內參一般顯影15s(影像條帶粗細深淺一致說明內參已調齊),內參好說明各步實驗操作均無誤,即可進行后續的目的蛋白檢測,目的蛋白結果的好壞就取決于其表達量以及抗體的特異性和效價了。
              6)與X膠片相比,wb成像系統具有瞬時影像處理、立即輸出、不需要膠片處理裝置及暗室等成本花費、可用軟件半定量分析等優點,因而在現在的實驗室里wb成像系統的使用已經逐漸取代傳統的暗室壓片曝光檢測。
              wb成像系統在一般的wb檢測過程中,都會有膜的封閉、一抗孵育、二抗孵育和底物顯色這四道“加工”工序。wb顯色的方法主要有放射自顯影、底物化學發光ECL、底物熒光ECF和底物DAB呈色四種方法,運用到實驗中包括:
              1、發表文章通常是用底物化學發光ECL,操作比較簡單,只需要購買現成的化學發光檢測試劑盒即可。
              2、試劑盒中一般使用的反應底物A和B分別是魯米諾(又名發光氨) 和過氧化氫,原理如下(二抗用HRP標記):在HRP的催化作用下,魯米諾與過氧化氫反應生成一種過氧化物,過氧化物不穩定隨即分解,形成一種能發光的電子激發中間體,當后者由激發態返回至基態,就會產生熒光,可用X膠片和成像設備進行檢測。
              3、使用傳統的X膠片顯影方法進行wb實驗時,后需要使用暗室曝光來進行ECL檢測,但是建造暗室浪費空間,在暗室中曝光步驟繁瑣,沖洗X光片時會接觸有毒的化學藥劑。
              4、wb成像系統能夠對ECL發光直接成像,獲得實驗結果,避免暗室曝光的不便。

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